二手高效液相色譜的分析

二手高效液相色譜法和其它分析方法相比具有很高的分辨率，為了達(dá)到zui佳的分離效果可以選擇流動(dòng)相和固定相:同時(shí)它的分析速度很快，一般只需要幾分鐘或者即使分鐘;它還具有很高的重復(fù)性，使用樣品還可以回收;它使用的色譜柱還可以重復(fù)使用，非常環(huán)保;具較高的自動(dòng)化程度，在進(jìn)行分析時(shí)，分析的精確度也很高。所以高液相色譜法被廣泛應(yīng)用，尤其是對(duì)大部分的有機(jī)化合物進(jìn)行分離和分析，在分離和分析高沸點(diǎn)、極性強(qiáng)、大分子、熱穩(wěn)定差的化合物時(shí)有很大的優(yōu)勢。

由于分離機(jī)制不同，二手高效液相色譜法可分為以下幾類：

一、吸附色譜法

以吸附劑為固定相的色譜方法稱為吸附色譜法。使用zui多的吸附色譜固定相是硅膠，流動(dòng)相一般使用一種種或多種有機(jī)溶劑的混合溶劑。在吸附色譜中,不同的組分因和固定相吸附力的不同而被分離。組分的極性越大、固定相的吸附力越強(qiáng)，則保留時(shí)間越長。流動(dòng)相的極性越大，洗脫力越強(qiáng)，則組分的保留時(shí)間越短。

二、液-液分配色譜法
液-液分配色譜的固定相和流動(dòng)相是互不相溶的兩種溶劑，分離時(shí)，組分溶入兩相，不同的組分因分配系數(shù)(K)的不同而被分離。目前廣泛使用的化學(xué)鍵合固定相是將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體上而制成的，使用化學(xué)鍵合固定相的色譜方法(簡稱鍵合相色譜法)可以用分配色譜的原理加以解釋。鍵合相色譜法在HPLC中占有極其重要的地位，是應(yīng)用zui廣的色譜法。

三、離子交換色譜法
離子對(duì)交換色譜法是以離子交換劑為固定相的色譜方法，組分因和離子交換劑親和力的不同而被分離。柱填料含有極性可離子化的基團(tuán)，如羧酸、磺酸或季銨離子，在合適的PH值下，這些基團(tuán)將解離，吸引相反電荷的物質(zhì)。由于離子型物質(zhì)能與柱填料反應(yīng)，所以可被分離。樣品中不同的組分因離子交換平衡常數(shù)的不同而分離o離子交換色譜的流動(dòng)相一般為一定PH值的緩沖溶液，有時(shí)也加入少里的有機(jī)溶劑，如乙醇、四氫呋喃、乙腈等，以增大組分在流動(dòng)相中的溶解度。流動(dòng)相的PH值影響離子交換劑的交換容里。對(duì)弱酸或弱堿性的被分離組分，流動(dòng)相的PH值還會(huì)影響其電離狀況，流動(dòng)相的PH值必須使待分離組分處于文庫用戶免費(fèi)上傳的可與卜離。共享的文檔，具體共享方式法用于分離在測定條件下呈離解狀態(tài)的組分，如具有酸性或堿性的化合定。只要帶有以下“共享法在藥物分析中的應(yīng)用非常廣泛，例如生物堿、磺胺類藥物、某些抗生當(dāng)便是該類了解這檔類型F均可采用此方法。

四、空間排斥色譜法
空間排斥色譜也稱為凝膠色譜其固定相是具有一定孔徑范圍的多孔性物質(zhì),即凝膠。被分離組分因分子空間尺寸大小的不同而被分離。當(dāng)組分被流動(dòng)相攜帶進(jìn)入色譜柱時(shí)，體積大的分子不能進(jìn)入固定相表面的孔穴中，而隨流動(dòng)相直接通過色譜柱，保留時(shí)間最短。體積較小的分子可以進(jìn)入孔穴內(nèi)，在色譜柱中所走的途徑較長，保留時(shí)間也較長。分子的尺寸越小，可進(jìn)入的孔穴越多，所走的路徑越長，保留時(shí)間也越長。因此，凝膠色譜中，在一定范.圍內(nèi)，體積不同的分子保留時(shí)間不同，從而達(dá)到分離的目的。凝膠色譜法主要用來分離高分子化合物，如蛋白質(zhì)、多糖等。由于分子里和分子體積有關(guān)，凝膠色譜還可以用來測定組分的分子里。

五、親和色譜法
親和色譜法是利用或模擬生物分子之間的專-性作用，從生物樣品中分離和分析一些特殊物質(zhì)的色譜方法。生物分子之間的專一作用包括抗原與抗體，酶與抑制劑，激素和藥物.與細(xì)胞受體，維生素與結(jié)合蛋白，基因與核酸之間的特異親和作用等。親和色譜的固定相是將配基連接于適宜的載體上而制成的，利用樣品中各種物質(zhì)與配基親和力的不同而達(dá)到分離。當(dāng)樣品溶液通過色譜柱時(shí)，待分離物質(zhì)X與配基L形成X-L復(fù)合物，而被結(jié)合在固定相上，其他物質(zhì)由于與配基無親和力而直接流出色譜柱，用適宜的流動(dòng)相將結(jié)合的待分離物質(zhì)洗脫，如采用一定濃度的醋酸或氨溶液為流動(dòng)相，減小待分離物質(zhì)與配基的親和力，使復(fù)合物離解，從而將被純化的物質(zhì)洗脫下來。HPAC可用于生物活性物質(zhì)的分離、純化和測定，還可以用來研究生物體內(nèi)分子間的
相互作用及其機(jī)理等。

六、手性色譜法
不少有機(jī)藥物的結(jié)構(gòu)中有不對(duì)稱碳原子，又稱手性碳原子，有手性碳原子的藥物具有旋光性。立體構(gòu)型不同的一對(duì)對(duì)映體，其藥效、毒副作用往往不相同。例如抗高血壓藥物a -甲基多巴是S-(-)體;又如氯霉素(含有二個(gè)手性碳原子)，只有D-(-)異構(gòu)體有效。而L-(+)異構(gòu)體完全無效。沙利度胺(反應(yīng)停)的兩個(gè)對(duì)映體對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜作用的效價(jià)相近，但只有左旋異構(gòu)體才有胚胎毒及致畸作用。因此，對(duì)映體的分離，在藥物的制備和質(zhì)量控制方面，都具有重要的意義。對(duì)映體在普通條件下的理化性質(zhì)是相同的，因此分離對(duì)映體需要在手性條件下進(jìn)行。分離對(duì)映體的色譜方法稱為手性色譜法。手性色譜法分為間接法和直接法兩種。間接法是將對(duì)映體與--定的手性衍生化試劑反應(yīng)，使其由對(duì)映體轉(zhuǎn)變?yōu)榉菍?duì)映體，再利用他們理化性質(zhì)的差異，用-般的色譜條件進(jìn)行分離。直接法不需作衍生化反應(yīng)，直接利用手性色譜柱或手性流動(dòng)相進(jìn)行分離，應(yīng)用較多。